2005-8液相色譜常見問題及處理辦法
液(ye)相色譜常見問題及處理辦(ban)法
問:用(yong)HPLC進行分(fen)析時(shi)保留時(shi)間有時(shi)發(fa)生漂移，有時(shi)發(fa)生快速變化，原因何在？如(ru)何解決？
答:關于漂移問題：
1． 溫(wen)(wen)度控制不好，解決方法(fa)是采(cai)用恒(heng)溫(wen)(wen)裝置，保持柱(zhu)溫(wen)(wen)恒(heng)定(ding)
2． 流(liu)動(dong)相(xiang)發生(sheng)變化(hua)，解(jie)決辦(ban)法是防止(zhi)流(liu)動(dong)相(xiang)發生(sheng)蒸發、反應等(deng)
3． 柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡
關于快速變化問題
1． 流(liu)速(su)發生變化(hua)，解決辦法是重新(xin)設定(ding)流(liu)速(su)，使之保持穩定(ding)
2． 泵中(zhong)有氣(qi)泡，可通(tong)過排氣(qi)等操作將氣(qi)泡趕出。
3． 流動相不合適(shi)，解決辦法為改換流動相或(huo)使(shi)流動相在控制室內進行適(shi)當混合
問: 色質聯用中毛細柱的選擇應(ying)注意什么問題？
答: 1． 柱效(xiao)要高(gao)
2． 熱穩定性好
3． 化學惰性強
具體選擇應注意
1． 柱極性(xing)(xing)。根據(ju)分(fen)析(xi)樣品(pin)選(xuan)擇不同極性(xing)(xing)的柱子進行(xing)分(fen)析(xi)
2． 柱子內徑。內徑大小決定柱容量(liang)
3． 液膜厚度(du)。分析(xi)樣品溫(wen)(wen)度(du)不(bu)一(yi)樣，對膜厚有不(bu)同要求，溫(wen)(wen)度(du)高(gao)液膜要厚，溫(wen)(wen)度(du)低液膜要薄(bo)
4． 柱(zhu)長度。柱(zhu)越長，柱(zhu)效越高，分離效果越好(hao)，但也存在吸附(fu)問題，柱(zhu)子(zi)過長，分析時間長，因此(ci)要根(gen)據樣品考(kao)慮柱(zhu)子(zi)長度
5． 外涂層（柱體）的選擇。
6． 另外還(huan)有儀器型號、分(fen)析對象(xiang)等因素
問:液(ye)相色(se)譜(pu)中(zhong)峰出(chu)現(xian)拖(tuo)尾或(huo)出(chu)現(xian)雙峰的原因是什(shen)么(me)？
答: 1． 篩板(ban)堵塞或(huo)柱(zhu)失效，解決辦法是反(fan)向沖(chong)洗柱(zhu)子(zi)，替換篩板(ban)或(huo)更換柱(zhu)子(zi)。
2． 存(cun)在干(gan)擾峰，解決(jue)辦法為(wei)使用(yong)較長的柱子，改換(huan)(huan)流動相或更換(huan)(huan)選擇性(xing)好(hao)的柱子
問：從那些方面可以簡單(dan)判別毛細(xi)管柱子的(de)熱穩定性好壞(huai)？
答： 1． 分(fen)配容(rong)量(liang)（或容(rong)量(liang)因(yin)子）K，好的(de)(de)(de)柱子在高溫運行后(hou)，分(fen)配容(rong)量(liang)K不應有明顯的(de)(de)(de)下降，否則，說明柱子的(de)(de)(de)熱穩定(ding)性不好
2． 理論塔板數(shu)n，熱穩定(ding)性好(hao)的柱子(zi)經(jing)受(shou)高溫(wen)后，理論塔板數(shu)應基本保持恒定(ding)
3． 柱子的(de)極(ji)性(xing)。熱穩定性(xing)好的(de)柱子，高溫前(qian)后極(ji)性(xing)變(bian)化不(bu)大，具體表現為保(bao)留(liu)指數I值(zhi)沒有大的(de)變(bian)化。
4． 噪(zao)聲(sheng)。熱穩定性好的柱(zhu)子在(zai)高溫下使用后，噪(zao)聲(sheng)不能(neng)增加。
5． 柱子的去活層，毛細管柱子涂固定液前內部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質量好的毛細管柱子高溫后，去活層不應該變
化，表現在對強(qiang)極性樣(yang)品或酸堿性樣(yang)品的吸(xi)附性不能(neng)增加(jia)。
問(wen)：為什么(me)進樣器內(nei)的玻璃(li)襯套會對(dui)色譜(pu)行(xing)為造成影響？
答：進樣器內的玻璃襯套(tao)主(zhu)要有下列作用：
1． 提供一(yi)個溫度均勻的汽(qi)化室(shi)，防止局部過(guo)熱。
2． 玻璃的惰性不不銹鋼(gang)好，減少了(le)在汽化期間樣品分解的可(ke)能性。
3． 易于拆換清(qing)洗，以保持清(qing)潔的汽化(hua)室(shi)(shi)表面，一些痕量非揮發(fa)性組分會(hui)逐(zhu)漸積(ji)累殘存于汽化(hua)室(shi)(shi)，高溫下會(hui)慢慢分解，使基流(liu)增(zeng)加，噪聲(sheng)增(zeng)大，通過(guo)清(qing)洗玻璃(li)襯(chen)套可以消除這(zhe)種(zhong)影響。
4． 可根據需要選擇管壁厚度及內徑適宜的玻璃襯套，以改變汽化室的體積，而不用更換整個進樣加熱塊。
從以上幾個方面(mian)可(ke)以知道玻璃襯套(tao)對色(se)譜行為造(zao)成(cheng)影響的(de)原因。
問：毛細(xi)管色譜分流進(jin)樣(yang)時，非線(xian)性(xing)分流的(de)主(zhu)要原因是什么？
答(da):1． 進(jin)樣器(qi)溫度太低，樣品汽(qi)化不完全，發生(sheng)分級分流。
2． 進樣(yang)(yang)器溫度太高(gao)，某些組分可(ke)能發(fa)生(sheng)熱(re)分解，也有的樣(yang)(yang)品可(ke)能發(fa)生(sheng)催(cui)化分解，或樣(yang)(yang)品部分地被(bei)吸附在進樣(yang)(yang)器內表(biao)面上。
3． 在分(fen)流點以前樣品沒(mei)有(you)混合(he)均(jun)勻(yun)或(huo)混合(he)不(bu)充分(fen)。
4． 系(xi)統的進樣墊(dian)、柱接頭等(deng)地方漏氣。
問：HPLC靈敏度不(bu)夠的主要原因及解決辦法(fa)
答: 1． 樣(yang)品量(liang)不足(zu)，解決(jue)辦法為增加樣(yang)品量(liang)
2． 樣品未從柱子(zi)中流(liu)(liu)出。可(ke)根據樣品的化(hua)學性質改變流(liu)(liu)動相或柱子(zi)
3． 樣(yang)品(pin)與(yu)檢測器不匹配。根(gen)據樣(yang)品(pin)化學性質調(diao)整波長或改換檢測器
4． 檢測器衰減(jian)太多。調整衰減(jian)即可。
5． 檢測器時(shi)間常數太大。解決辦法(fa)為降低時(shi)間參數
6． 檢測(ce)器池窗污染(ran)。解決辦(ban)法(fa)為清洗池窗。
7． 檢(jian)測池中(zhong)有氣泡。解決(jue)辦法為排氣。
8． 記錄(lu)儀測(ce)壓范圍不當。調整(zheng)電壓范圍即(ji)可。
9． 流動相流量不合適(shi)。調(diao)整流速即可。
10． 檢測(ce)器與(yu)記(ji)錄儀(yi)(yi)超(chao)出校正曲線(xian)。解決辦法為檢查記(ji)錄儀(yi)(yi)與(yu)檢測(ce)器，重作校正曲線(xian)。
問：做(zuo)HPLC分析時，柱(zhu)壓不穩定，原因何(he)在？如(ru)何(he)解決？
答：原因可能有：
1． 泵(beng)(beng)內有空(kong)(kong)氣，解決(jue)的辦法是清除泵(beng)(beng)內空(kong)(kong)氣，對溶(rong)劑進行脫氣處理；
2． 比例閥失效，更(geng)換比例閥即可；
3． 泵(beng)密封墊損壞，更換密封墊即可；
4． 溶劑(ji)中的(de)氣(qi)泡，解決的(de)辦(ban)法(fa)是(shi)對溶劑(ji)脫(tuo)(tuo)氣(qi)，必要時改變脫(tuo)(tuo)氣(qi)方法(fa)；
5． 系統檢(jian)漏(lou)，找(zhao)出漏(lou)點，密封即可(ke)；
6． 梯度洗脫(tuo)，這時壓力波(bo)動是正(zheng)常的。
問：做PGS/MS分析時(shi)，如何防(fang)止焦油狀污染物(wu)進入毛細(xi)柱？
答：聚合物，尤其是一些含氮，硫(liu)及鹵素的高分子(zi)裂(lie)解時，常(chang)有焦油(you)狀物質產生。為防止這種焦油(you)狀物質進入毛(mao)細柱(zhu)造成污染而使柱(zhu)性能(neng)下(xia)降(jiang)，可采用(yong)保護預柱(zhu)，即(ji)在裂(lie)解器與毛(mao)細柱(zhu)之間接一填充預柱(zhu)，通(tong)過控制(zhi)(zhi)預柱(zhu)溫(wen)度而使焦油(you)狀物質滯留在預柱(zhu)內，預柱(zhu)可置于GC氣(qi)化室內，這樣(yang)既容易(yi)控制(zhi)(zhi)溫(wen)度，又減少系統的死體積，當然(ran)，預柱(zhu)填料需經常(chang)更換。
問：我最(zui)近更換(huan)了另一種牌號的ODS柱(zhu)，雖然分(fen)離情況仍可以，但保留時間不能重現(xian)，為什(shen)么？
答(da)：這是(shi)因為(wei)被分析物(wu)可能具(ju)有形成(cheng)氫(qing)鍵(jian)的(de)能力(li)。盡管(guan)過去幾(ji)年(nian)來，填料(liao)的(de)制造技術有了極大的(de)提高，但不(bu)(bu)(bu)同(tong)的(de)廠商的(de)ODS填料(liao)表面(mian)硅醇(chun)基(ji)的(de)濃度(du)不(bu)(bu)(bu)同(tong)。正(zheng)是(shi)這些硅醇(chun)基(ji)可能與樣品發(fa)生(sheng)相互作(zuo)用(yong)。因此，同(tong)一被分析物(wu)中(zhong)的(de)各組分在(zai)不(bu)(bu)(bu)同(tong)牌(pai)號的(de)ODS柱上(shang)的(de)相對保留時間就可能不(bu)(bu)(bu)同(tong)。在(zai)流動相中(zhong)加入(ru)少量(liang)競爭物(wu)，如三乙基(ji)胺（TEA），將會使硅醇(chun)基(ji)的(de)成(cheng)鍵(jian)能力(li)飽(bao)和，從而能保證不(bu)(bu)(bu)同(tong)牌(pai)號柱子上(shang)的(de)相對保留時間具(ju)有較(jiao)好(hao)的(de)重現性。
問：我購(gou)買的HPLC柱驗收(shou)測試時柱壓過高(gao)，請問為什么？
答：柱壓過高是(shi)HPLC柱用(yong)戶最常(chang)碰到(dao)的(de)問題(ti)。其原因有多方面，而且(qie)常(chang)常(chang)并不是(shi)柱子本身的(de)問題(ti)，您可按下面步(bu)驟(zou)檢查問題(ti)的(de)起因。
1． 拆去保(bao)護(hu)預柱，看柱壓(ya)是(shi)否(fou)還高，否(fou)則是(shi)保(bao)護(hu)柱的問題，若(ruo)柱壓(ya)仍高，再檢查；
2． 把色譜柱從儀器上(shang)取(qu)下(xia)(xia)，看(kan)壓力是(shi)(shi)否(fou)下(xia)(xia)降(jiang)(jiang)，否(fou)則(ze)是(shi)(shi)管路堵塞，需(xu)清洗(xi)，若壓力下(xia)(xia)降(jiang)(jiang)，再檢查；
3． 將柱子的進(jin)出口反過來接(jie)在(zai)儀器上，用10倍柱體積(ji)的流(liu)動相沖洗柱子，（此時不要連接(jie)檢測器，以防固體顆粒進(jin)入流(liu)動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；
4． 更(geng)換柱子入(ru)口篩(shai)板，若柱壓(ya)(ya)下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhi)，正是這些(xie)雜質(zhi)將篩(shai)板堵塞(sai)引起壓(ya)(ya)力上升。若柱壓(ya)(ya)還(huan)高(gao)，請(qing)與(yu)廠商聯系(xi)。
一般情(qing)況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne
7315型過濾(lv)器就(jiu)是(shi)解(jie)決這一(yi)問題的最(zui)佳選(xuan)擇。
問：高溫毛細柱的使(shi)用(yong)壽命一般為多(duo)長？
答：毛細柱(zhu)壽命鋤決定(ding)于柱(zhu)子本身(shen)的(de)(de)性能外，在(zai)很(hen)大程(cheng)度(du)上取決于使用(yong)情況，如使用(yong)溫度(du)、樣(yang)(yang)品(pin)(pin)狀(zhuang)態，進樣(yang)(yang)量等，如果(guo)在(zai)其使用(yong)溫度(du)范(fan)圍(wei)內，樣(yang)(yang)品(pin)(pin)干(gan)凈(jing)，色譜柱(zhu)不被污染的(de)(de)情況下，柱(zhu)子壽命一般在(zai)2-3年(nian)之(zhi)間。
問：如(ru)毛細管柱(zhu)被(bei)污染，柱(zhu)效和(he)分辨率降低，有何(he)方法(fa)使它恢復？是否可通過老化來(lai)解(jie)決？
答：根據柱污染程度可采取不同的方法來解決，如果污染不嚴重，污染物沸點不是太高，可通過老化來解決，但老化溫度不可超過柱子的最高使用溫度，且一般要較長時間（8-30）小時，如果污染較嚴重，或通過老化仍不能使柱性能恢復，那就必須采用溶劑清洗，通常是用5倍柱容積的溶劑（如正戊烷，二氯甲烷等）通過色譜柱。當然，清洗熔劑用的越多，對柱性能的損壞越大，清洗完后，在通載氣老化一定時間，如果柱性能恢復，便可繼續使用。
必須指(zhi)出：只有交聯柱(zhu)才能(neng)清(qing)洗(xi)(xi)，對于非交聯柱(zhu)，清(qing)洗(xi)(xi)柱(zhu)子會(hui)徹底失(shi)效(xiao)，因為(wei)固定液(ye)被洗(xi)(xi)掉了(le)，至于清(qing)洗(xi)(xi)用熔(rong)劑(ji)的選擇，可(ke)參考說明書。
問：BPX70毛細柱是否可用于GC/MS分(fen)析？
答：完全可(ke)(ke)以。BPX70為極(ji)性柱，使用溫度范圍寬(kuan)（25-260C），程序升溫可(ke)(ke)達(da)290C，流失低，適合于分析脂(zhi)肪酸(suan)甲酯的的各種位置和幾何異(yi)構體，藥物(wu)異(yi)構體，碳水化合物(wu)等。因BPX70為交聯柱，故用于GC/MS很穩定(ding)，污染后可(ke)(ke)清洗再生。
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