問：用(yong)HPLC進(jin)行分析時保留時間有(you)(you)時發生漂移，有(you)(you)時發生快(kuai)速變(bian)化，原因何在?如何解決?

答：關于漂移問題：

1.溫(wen)度控制不好，解決方法是采(cai)用恒溫(wen)裝置，保持柱溫(wen)恒定

2.流(liu)動相發(fa)生變(bian)化(hua)，解決辦法是防止流(liu)動相發(fa)生蒸發(fa)、反應等(deng)

3.柱子(zi)未平(ping)衡(heng)好，需對柱子(zi)進(jin)行更(geng)長時間的平(ping)衡(heng)

關于快速變化問題

1流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持(chi)穩定

2泵中(zhong)有氣泡，可(ke)通過排氣等操(cao)作將氣泡趕出。

3流動相(xiang)不合適，解決辦法為改換流動相(xiang)或使流動相(xiang)在控制室內(nei)進行(xing)適當混(hun)合

問：色(se)質聯(lian)用中(zhong)毛細柱的選擇應注意什(shen)么(me)問題?

答：1柱效要高

2熱穩定性好

3化學惰性強

具體選擇應注意

1柱極(ji)性(xing)。根據分析樣(yang)品選擇不(bu)同極(ji)性(xing)的柱子(zi)進行分析

2柱子內徑。內徑大(da)小決(jue)定柱容量

3液(ye)膜厚度(du)。分(fen)析樣(yang)品(pin)溫度(du)一(yi)不(bu)一(yi)樣(yang)，對膜厚有(you)不(bu)同要(yao)求(qiu)，溫度(du)高液(ye)膜要(yao)厚，溫度(du)低液(ye)膜要(yao)薄

4柱(zhu)長度。柱(zhu)越長，柱(zhu)效(xiao)越高，分離效(xiao)果(guo)越好，但也存在吸附問題，柱(zhu)子過(guo)長，分析(xi)時間(jian)長，因此要根(gen)據樣品考慮柱(zhu)子長度

5外涂層(柱體)的選擇

6另(ling)外還有儀器型號、分(fen)析對象(xiang)等因(yin)素(su)

問(wen)：液相色譜(pu)中(zhong)峰出現拖(tuo)尾或出現雙(shuang)峰的原(yuan)因(yin)是什么?

答：1.篩板堵塞(sai)或柱(zhu)失效，解決(jue)辦(ban)法(fa)是反向沖洗柱(zhu)子，替換(huan)篩板或更換(huan)柱(zhu)子。

2.存(cun)在干(gan)擾峰(feng)，解決辦法為使用較長的柱子(zi)，改換流(liu)動(dong)相或(huo)更(geng)換選擇性好的柱子(zi)

問：從那些方面可以簡單判別毛細管柱(zhu)子的(de)熱穩定性好(hao)壞(huai)?

答：1.分配容量(liang)(liang)(或(huo)容量(liang)(liang)因子)K，好的(de)柱(zhu)子在高(gao)溫(wen)運行后，分配容量(liang)(liang)K不應有(you)明顯的(de)下降(jiang)，否(fou)則，說(shuo)明柱(zhu)子的(de)熱(re)穩定性(xing)不好。

2.理(li)(li)論(lun)塔(ta)板數n，熱(re)穩定(ding)性好的柱子經受高溫后，理(li)(li)論(lun)塔(ta)板數應基本保持(chi)恒定(ding)

3柱(zhu)子的(de)極性(xing)(xing)。熱穩(wen)定性(xing)(xing)好的(de)柱(zhu)子，高溫前后極性(xing)(xing)變化不大(da)，具(ju)體(ti)表現(xian)為保留指(zhi)數I值沒(mei)有大(da)的(de)變化。

4噪聲(sheng)。熱穩定性好(hao)的柱子在高溫下使用后，噪聲(sheng)不能增加.

5柱子的去活(huo)(huo)層，毛(mao)細管柱子涂固定液前內部一般(ban)要(yao)用去活(huo)(huo)性(xing)(xing)試(shi)劑去活(huo)(huo)以增加惰(duo)性(xing)(xing)。質(zhi)量(liang)好的毛(mao)細管柱子高溫后，去活(huo)(huo)層不應該變化，表(biao)現在對強極(ji)性(xing)(xing)樣品或(huo)酸堿性(xing)(xing)樣品的吸附性(xing)(xing)不能增加。

問：為(wei)什么進樣(yang)器(qi)內的玻璃襯套會(hui)對色譜行為(wei)造成影響?

答：進樣器內的玻璃襯套主(zhu)要有下列作(zuo)用：

1提供一個溫度均勻(yun)的汽(qi)化室，防止(zhi)局部過(guo)熱。

2玻璃的惰(duo)性不(bu)如不(bu)銹鋼好，減少(shao)了在汽(qi)化期間樣品分解的可能性。

3易于拆換清洗(xi) ，以(yi)保(bao)持清潔的汽(qi)化室(shi)表(biao)面，一些(xie)痕量非揮發性組分會(hui)逐漸積累(lei)殘存于汽(qi)化室(shi)，高溫(wen)下會(hui)慢慢分解，使基流增加，噪聲增大(da)，通過清洗(xi)玻璃襯(chen)套可以(yi)消除這種影響。

4可(ke)根據需要選擇(ze)管壁厚度及(ji)內(nei)徑(jing)適(shi)宜的(de)玻璃襯套，以改(gai)變汽(qi)化室的(de)體(ti)積(ji)，而不(bu)用更(geng)換整個進樣(yang)加熱塊。從以上(shang)幾個方(fang)面(mian)可(ke)以知道玻璃襯套對色譜(pu)行(xing)為造成影響的(de)原因(yin)。

問：毛(mao)細管色譜分(fen)(fen)流進樣時，非(fei)線性分(fen)(fen)流的主要原因是什么?

答：1進樣(yang)器溫度太低，樣(yang)品汽化(hua)不完(wan)全，發生分級分流(liu)。

2進樣器溫度太高(gao)，某些(xie)組(zu)分(fen)可能發生熱分(fen)解(jie)，也(ye)有的樣品可能發生催化(hua)分(fen)解(jie)，或(huo)樣品部分(fen)地被吸附(fu)在進樣器內表面上。

3在分流點以前樣品沒(mei)有(you)混合均勻或(huo)混合不(bu)充(chong)分。

4系統的進樣墊，柱接頭等地方漏(lou)氣。

問：HPLC靈敏度不(bu)夠的主要(yao)原因及解決辦法

答：1樣品(pin)量(liang)不足：解(jie)決辦法為(wei)增加(jia)樣品(pin)量(liang)

2樣品未從柱(zhu)子中流出：可(ke)根據樣品的化(hua)學(xue)性質(zhi)改變流動相或柱(zhu)子

3樣品與檢測(ce)器(qi)不匹配：根據樣品化學性(xing)質調整波(bo)長或改換檢測(ce)器(qi)

4檢測器衰(shuai)(shuai)減(jian)太(tai)多(duo)：調整衰(shuai)(shuai)減(jian)即(ji)可。

5檢(jian)測器(qi)時(shi)間常數(shu)太大(da)：解決辦法為(wei)降低時(shi)間參數(shu)

6檢測器池窗(chuang)污染：解決辦法為清洗池窗(chuang)。

7檢(jian)測池中有氣泡：解決辦法為排氣。

8記錄儀測壓范圍不當：調整電壓范圍即可(ke)。

9流(liu)動相流(liu)量不(bu)合適：調整流(liu)速即可。

10檢(jian)測(ce)器與記錄(lu)儀(yi)超(chao)出校(xiao)正(zheng)曲(qu)(qu)線(xian)：解決辦法為檢(jian)查記錄(lu)儀(yi)與檢(jian)測(ce)器，重作校(xiao)正(zheng)曲(qu)(qu)線(xian)。

問：做HPLC分析時，柱壓不穩定(ding)，原(yuan)因何在?如何解決?

答：原因可能有：

1泵內有空氣(qi)，解決的辦法(fa)是清除(chu)泵內空氣(qi)，對溶(rong)劑(ji)進(jin)行脫氣(qi)處(chu)理；

2比例(li)閥失效，更換(huan)比例(li)閥即可(ke)。

3泵密封墊損壞，更換密封墊即可(ke)。

4溶劑(ji)中(zhong)的氣(qi)泡，解(jie)決的辦法是(shi)對溶劑(ji)脫(tuo)氣(qi)，必要時改變脫(tuo)氣(qi)方法；

5系統檢漏，找出(chu)漏點(dian)，密封即(ji)可。

6梯度洗脫，這時(shi)壓力波(bo)動是正常(chang)的。

問：做PGS／MS分析時(shi)，如(ru)何防止焦油狀污染物進入毛細(xi)柱?

答：聚合物(wu)，尤(you)其是一(yi)(yi)些含氮(dan)、硫及鹵素的(de)高分子裂(lie)解時，常有(you)焦(jiao)油狀物(wu)質(zhi)產(chan)生。為(wei)防止這種焦(jiao)油狀物(wu)質(zhi)進入毛細柱造(zao)成(cheng)污染而使(shi)(shi)柱性能下降(jiang)，可(ke)采(cai)用保護預(yu)柱，即在裂(lie)解器與毛細柱之間接一(yi)(yi)填充預(yu)柱，通過控(kong)制預(yu)柱溫度而使(shi)(shi)焦(jiao)油狀物(wu)質(zhi)滯留在預(yu)柱內，預(yu)注可(ke)置于GC氣化(hua)室內，這樣既容易控(kong)制溫度，又減少系統的(de)死(si)體(ti)積，當然，預(yu)柱填料需(xu)經常更換(huan)。

問：我最近更換了另一種(zhong)牌號的ODS柱，雖然分(fen)離情況(kuang)仍(reng)可以(yi)，但(dan)保留時(shi)間不能重(zhong)現，為什么(me)?

答：這(zhe)是因為被分析(xi)物(wu)可(ke)能(neng)(neng)具有形成氫健的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)能(neng)(neng)力(li)。盡管過去幾年來，填(tian)(tian)料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)制造技術(shu)有了極大的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)提(ti)高，但不(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)廠商的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)ODS填(tian)(tian)料表面硅(gui)醇(chun)基的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)濃(nong)度不(bu)同。正(zheng)是這(zhe)些硅(gui)醇(chun)基可(ke)能(neng)(neng)與(yu)樣品發生相互(hu)作(zuo)用(yong)。因此(ci)，同一被分析(xi)物(wu)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)各組分在不(bu)同牌號(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)ODS柱(zhu)(zhu)上的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)相對保留(liu)時間就(jiu)可(ke)能(neng)(neng)不(bu)同。在流動相中加入少量(liang)競爭物(wu)，如三乙基胺(TEA)，將會(hui)使(shi)硅(gui)醇(chun)基的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)成鍵能(neng)(neng)力(li)飽和，從而(er)保證不(bu)同牌號(hao)柱(zhu)(zhu)子上的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)相對保留(liu)時間具有較好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)重現性。

問(wen)：我購買的HPLC柱(zhu)驗收(shou)測(ce)試時柱(zhu)壓過高，請問(wen)為什么?

答：柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。
1拆去保護柱(zhu)，看柱(zhu)壓是否(fou)還高，否(fou)則是保護柱(zhu)的問題，若柱(zhu)壓仍高，再檢(jian)查(cha)；

2把色(se)譜柱從儀器上取下，看壓(ya)力(li)(li)是(shi)否下降，否則是(shi)管(guan)路(lu)堵(du)塞，需清洗，若壓(ya)力(li)(li)下降，再(zai)檢查(cha)。

3將柱子的進出口反過來(lai)接在儀器上(shang)，用10倍柱體(ti)積的流動(dong)相沖洗(xi)柱子，(此時不(bu)要連接檢測器，以防固體(ti)顆粒進入流動(dong)性)。這(zhe)時，如果柱壓仍不(bu)下降，再(zai)檢查(cha)；

4更換(huan)柱(zhu)(zhu)子入口篩板，若柱(zhu)(zhu)壓下(xia)降(jiang)，說(shuo)明你的溶劑(ji)或樣品含有(you)顆粒雜(za)質，正是這些(xie)雜(za)質將篩板堵塞引(yin)起壓力(li)上升。若柱(zhu)(zhu)壓還高，請與(yu)(yu)廠商聯(lian)系。一(yi)(yi)般情(qing)況下(xia)，在進樣器(qi)與(yu)(yu)保(bao)護柱(zhu)(zhu)之間(jian)接一(yi)(yi)個在線過(guo)(guo)濾器(qi)便可避免柱(zhu)(zhu)壓過(guo)(guo)高的問題(ti)，SGE提供的Rheodyne 7315型過(guo)(guo)濾器(qi)就是解(jie)決這一(yi)(yi)問題(ti)的最佳(jia)選擇。

問：高溫(wen)毛細柱的(de)使用壽命一般為(wei)多長?

答：毛(mao)細柱壽命(ming)(ming)除(chu)決定于柱子(zi)本身的性能外，在很(hen)大程度上取決于使(shi)用(yong)(yong)情況，比如使(shi)用(yong)(yong)溫(wen)度、樣品(pin)狀態，進樣量等，如果在其使(shi)用(yong)(yong)溫(wen)度范圍內，樣品(pin)干凈，色譜柱不(bu)被污染的情況下，柱子(zi)壽命(ming)(ming)一般在2—3年之間。

問：如毛細管(guan)柱被污染，柱效和分辨率降低，有何方法使它恢(hui)復?是否可通過老化來解決?

答：根(gen)據柱(zhu)污染程度(du)(du)(du)可(ke)(ke)采取不(bu)(bu)同的(de)(de)方法來解決，如果(guo)污染不(bu)(bu)嚴重，污染物沸點不(bu)(bu)是太(tai)高，可(ke)(ke)通過(guo)(guo)老(lao)化(hua)(hua)來解決，但老(lao)化(hua)(hua)溫(wen)度(du)(du)(du)不(bu)(bu)可(ke)(ke)超過(guo)(guo)柱(zhu)子的(de)(de)最高使用溫(wen)度(du)(du)(du)，且一般要(yao)較長(chang)時間(jian)(8—30小時)，如果(guo)污染較嚴重，或通過(guo)(guo)老(lao)化(hua)(hua)仍不(bu)(bu)能使柱(zhu)性(xing)能恢復(fu)，那(nei)就必須采用溶劑清洗(xi)(xi)，通常是用5倍柱(zhu)容積的(de)(de)溶劑(如正戊烷，二氯甲烷等)通過(guo)(guo)色譜柱(zhu)。當然，清洗(xi)(xi)溶劑用的(de)(de)越多(duo)，對柱(zhu)性(xing)能的(de)(de)損壞越大，清洗(xi)(xi)完后，在通載氣老(lao)化(hua)(hua)一定時間(jian)，如果(guo)柱(zhu)性(xing)能恢復(fu)，便可(ke)(ke)繼續使用。必須指出：只(zhi)有(you)交聯柱(zhu)才能清洗(xi)(xi)，對于(yu)非交聯柱(zhu)，清洗(xi)(xi)柱(zhu)會徹底(di)失效，因為(wei)固(gu)定液被(bei)洗(xi)(xi)掉(diao)了，至(zhi)于(yu)清洗(xi)(xi)用溶劑的(de)(de)選擇，可(ke)(ke)參(can)考說明書。

問：BPX70毛細管柱是(shi)否(fou)可用于(yu)GC／MS分(fen)析?

答：完全可(ke)以，BPX70為極性柱，使用溫度范(fan)圍寬(kuan)(25—260℃)，程序升(sheng)溫可(ke)達290℃，流失低，適合(he)于分析脂肪酸甲酯的各種(zhong)位置和幾何(he)異構體，藥物(wu)(wu)異構體，碳(tan)水化合(he)物(wu)(wu)等。因(yin)BPX70為交(jiao)聯住，故(gu)用于GC／MS很(hen)穩定，污染后可(ke)清洗再生(sheng)。

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